基因組編輯技術(shù)CRISPR/Cas9被《科學(xué)》雜志列為2013年十大科技進(jìn)步之一,受到人們的高度重視。CRISPR是規(guī)則間隔的短回文重復(fù)序列的縮寫,Cas9是CRISPR相關(guān)蛋白的縮寫。CRISPR/Cas最初是在細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)的,是細(xì)菌用來識別和破壞噬菌體和其他病原體的防御系統(tǒng)。
在CRISPR/Cas9系統(tǒng)中,酶Cas9在脫氧核糖核酸靶位點(diǎn)裂解,其中這樣的靶位點(diǎn)被確定使得稱為CRISPR核糖核酸的核糖核酸分子通過堿基配對與另一種稱為tracrRNA的核糖核酸分子結(jié)合在一起,利用其序列的一部分形成嵌合核糖核酸(tracrRNA/crRNA),然后通過堿基配對另一部分CR RNA序列與靶脫氧核糖核酸位點(diǎn),這樣,該嵌合核糖核酸可以引導(dǎo)Cas9結(jié)合到該靶位點(diǎn)并進(jìn)行裂解。
在實(shí)際應(yīng)用中,可以使用tracrRNA和crRNA作為兩種導(dǎo)向核糖核酸(gRNA),或者將它們?nèi)诤显谝黄鹦纬蓡蝹€導(dǎo)向核糖核酸(核糖核酸(single guide核糖核酸,sgRNA),并使用它們來引導(dǎo)酶Cas9結(jié)合到靶脫氧核糖核酸序列并進(jìn)行切割,其中Cas9和sgRNA統(tǒng)稱為Cas9-sgRNA系統(tǒng)。
